Plasmide CRISPR d'Activation (h) Maltase-glucoamylase: sc-404265-ACT

Le gène humain **MGAM** code la **maltase‑glucoamylase**, une **α‑glucosidase** de la bordure en brosse intestinale qui hydrolyse les résidus terminaux de glucose liés en **α‑1,4** à partir du maltose, du maltotriose et des maltooligosaccharides, afin de libérer du glucose libre. Cette enzyme intervient dans les dernières étapes de la digestion de l’amidon alimentaire et du glycogène, en complément fonctionnel de la sucrase‑isomaltase, et module la disponibilité postprandiale des glucides à la surface muqueuse. L’expression et l’activité de MGAM s’inscrivent à l’interface des programmes de différenciation des entérocytes et des réseaux de détection des nutriments qui influencent le métabolisme épithélial. Des diminutions génétiques ou acquises de la fonction de MGAM ont été associées à des phénotypes de malabsorption des glucides et sont pertinentes pour l’étude des dysfonctions intestinales et de l’homéostasie métabolique.

Maltase-glucoamylase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MGAM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Maltase-glucoamylase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MGAM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MGAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Maltase-glucoamylase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MGAM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Maltase-glucoamylase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Maltase-glucoamylase dans les cellules tumorales présentant une expression de MGAM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.