Plasmide CRISPR d'Activation (h) MALT1: sc-400791-ACT

La MALT1 humaine (mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma translocation protein 1) est une paracaspase qui agit comme un nœud central de signalisation en aval des récepteurs de l’antigène dans les lymphocytes, en intégrant les signaux issus du complexe CARD11–BCL10–MALT1 (CBM) pour déclencher l’activation canonique des voies NF-κB et MAPK. Au-delà de son rôle de plateforme (scaffold), l’activité protéase de MALT1 clive des substrats spécifiques afin d’ajuster l’activation des cellules T et B, la production de cytokines et les programmes de survie. Une signalisation MALT1 dérégulée est associée à une activation immunitaire aberrante et est impliquée dans la biologie des hémopathies malignes lymphoïdes via des programmes transcriptionnels dépendants de NF-κB altérés. La modulation de l’expression de MALT1 est donc utile pour disséquer la transcription dépendante des signaux, l’architecture des voies des récepteurs immunitaires et la régulation contextuelle des gènes inflammatoires.

MALT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MALT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MALT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MALT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MALT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MALT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MALT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MALT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MALT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MALT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.