Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAG: sc-401604-ACT

La glycoprotéine associée à la myéline (MAG, *Myelin Associated Glycoprotein*) est un membre de la superfamille des immunoglobulines, de type I, à domaine transmembranaire, enrichi dans les oligodendrocytes et les cellules de Schwann, où elle assure l’adhésion axone–glie et contribue à la stabilité de la myéline. En reconnaissant des gangliosides sialylés et d’autres glycoconjugués neuronaux apparentés, MAG influence la croissance des neurites, le maintien du calibre axonal et l’intégrité à long terme des fibres myélinisées. MAG participe à des voies qui régulent les interactions myéline–axone ainsi que l’inhibition de la repousse axonale après lésion, reliant ainsi son activité à des mécanismes de plasticité et de réparation neurales. Une expression altérée de MAG ou une réactivité immunitaire dirigée contre MAG a été associée à des contextes démyélinisants et neurodégénératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie de la substance blanche.

MAG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAG dans les cellules tumorales présentant une expression de MAG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.