Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mac-2BP: sc-403108-ACT

LGALS3BP code pour Mac-2BP (protéine de liaison à la galectine-3), une glycoprotéine sécrétée et associée à la matrice extracellulaire qui module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, et peut influencer l’adhésion et la signalisation des cellules immunitaires via des processus impliquant les lectines et les intégrines. Mac-2BP est impliquée dans la régulation des réponses inflammatoires et du remodelage tissulaire, avec des liens rapportés, dans certains contextes, avec des programmes associés à l’interféron et la biologie des vésicules extracellulaires. Une expression altérée de LGALS3BP/Mac-2BP a été observée dans de nombreux cadres pathologiques, notamment le cancer et des affections inflammatoires chroniques, où elle est fréquemment étudiée comme marqueur du remodelage du microenvironnement et de la modulation immunitaire. Ces caractéristiques font de LGALS3BP une cible utile pour étudier comment les réseaux de glycoprotéines extracellulaires influencent la signalisation, la migration et les interactions immunitaires dans des modèles cellulaires humains.

Mac-2BP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGALS3BP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mac-2BP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGALS3BP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGALS3BP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mac-2BP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGALS3BP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mac-2BP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mac-2BP dans les cellules tumorales présentant une expression de LGALS3BP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.