Plasmide CRISPR/Cas9 KO LZIP (h): sc-406526

Présentation

CREB3 code pour LZIP, un facteur de transcription bZIP (basic leucine zipper) localisé au réticulum endoplasmique, qui peut être activé par une protéolyse intramembranaire régulée afin de moduler l’expression génique. LZIP participe aux programmes cellulaires d’adaptation au stress, en intégrant les signaux de stress du RE et de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) au contrôle transcriptionnel de la capacité de la voie de sécrétion et de l’homéostasie métabolique. Par ses interactions avec d’autres facteurs bZIP et avec des éléments promoteurs, il influence des voies liées à l’inflammation, à la différenciation, ainsi qu’au métabolisme des lipides et du glucose. Une activité dérégulée de CREB3/LZIP a été associée dans la littérature à une altération de la signalisation du stress et à une reprogrammation transcriptionnelle observées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LZIP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CREB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CREB3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CREB3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LZIP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CREB3 pour l'étude de la signalisation de LZIP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CREB3 essentiels à la fonction de LZIP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CREB3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LZIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LZIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CREB3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LZIP plasmide HDR (h) et le LZIP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CREB3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CREB3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.