Plasmide Double Nickase (h) LYPLA3: sc-409535-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LYPLA3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LYPLA3 Double Nickase (h) et le plasmide LYPLA3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PLA2G15. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LYPLA3 Antibody (B-2): sc-376078
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LYPLA3 | sc-409535-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LYPLA3 | sc-409535-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLA2G15 code la lysophospholipase A3 (LYPLA3), une hydrolase à sérine impliquée dans la désacylation des lysophospholipides et le remodelage des réservoirs lipidiques cellulaires. En régulant le renouvellement des lysophospholipides et des acides gras, LYPLA3 peut influencer la dynamique membranaire, l’homéostasie des gouttelettes lipidiques et les voies de signalisation lipidique en aval qui relient le métabolisme aux réponses inflammatoires et au stress. Une activité lysophospholipase altérée a été étudiée dans le contexte d’un métabolisme lipidique dérégulé, du stress oxydatif et de phénotypes de signalisation immunitaire. La LYPLA3 humaine présente donc un intérêt pour disséquer les réseaux d’enzymes lipidiques et leur contribution à des états cellulaires pertinents pour la maladie dans des modèles mécanistiques.
LYPLA3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLA2G15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLA2G15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLA2G15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLA2G15.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.