Plasmide CRISPR d'Activation (h) LYPD8: sc-418674-ACT

LYPD8 (Ly6/PLAUR domain containing 8) code une protéine sécrétée de la famille Ly6, associée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), enrichie au niveau des surfaces muqueuses, où elle contribue à l’homéostasie de la barrière épithéliale et aux interactions hôte–microbiote. Dans le tractus gastro-intestinal, LYPD8 participerait à limiter l’accès des bactéries à la couche épithéliale en modulant la motilité microbienne et l’organisation spatiale des microbes au sein du mucus, contribuant ainsi à façonner le tonus de l’immunité innée. Par ces processus liés à la barrière, LYPD8 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant la défense muqueuse, l’inflammation et la signalisation dépendante du microbiome. Une expression ou une fonction altérée de LYPD8 a été associée à des états inflammatoires intestinaux et à des réponses au stress épithélial, ce qui étaye sa pertinence dans des modèles de colite, de dysbiose et de dysfonction de la barrière.

LYPD8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LYPD8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LYPD8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LYPD8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LYPD8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LYPD8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LYPD8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LYPD8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LYPD8 dans les cellules tumorales présentant une expression de LYPD8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.