Plasmide Double Nickase (h) LYAG: sc-402385-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LYAG correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LYAG Double Nickase (h) et le plasmide LYAG Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GAA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LYAG Antibody (G-7): sc-373745
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LYAG | sc-402385-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LYAG | sc-402385-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GAA** code l’α‑glucosidase acide lysosomale (LYAG), une hydrolase des glycosides nécessaire à la dégradation progressive du glycogène en glucose dans la lumière lysosomale. Cette enzyme contribue à l’homéostasie du lysosome et s’inscrit dans les voies autophagie–lysosome en empêchant l’accumulation intralysosomale de glycogène, laquelle peut perturber secondairement le trafic intracellulaire et le renouvellement des organites. Une activité altérée de GAA est associée à une pathologie de stockage du glycogène avec des effets marqués sur les muscles squelettiques et cardiaques, faisant de ce locus un modèle majeur pour l’étude du métabolisme lysosomal et de l’équilibre énergétique cellulaire. GAA est donc fréquemment étudié dans le contexte de la fonction lysosomale, des réponses au stress et des relations génotype–phénotype dans les mécanismes des maladies métaboliques.
LYAG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GAA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GAA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GAA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GAA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.