Plasmide Double Nickase (h) Lumican: sc-402001-NIC

LUM code la lumicane, un petit protéoglycane sécrété riche en leucines de la matrice extracellulaire, qui se lie aux fibrilles de collagène et régule la fibrillogenèse, l’hydratation tissulaire et l’architecture du stroma. La lumicane module la signalisation cellule–matrice et influence des processus tels que la réparation des plaies, la migration cellulaire et la mécanotransduction via des interactions avec les intégrines et la disponibilité des facteurs de croissance au sein de la matrice. Dans les tissus humains, l’expression de LUM est marquée dans la cornée, la peau et le stroma conjonctif, où elle contribue à l’organisation du collagène et aux propriétés de la matrice liées à la transparence. Des niveaux de lumicane dérégulés et un remodelage altéré de la matrice extracellulaire ont été associés au remodelage fibrotique, à des microenvironnements inflammatoires et à des interactions tumeur–stroma pertinentes pour l’invasion et la formation de niches métastatiques.

Lumican Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LUM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LUM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LUM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LUM.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.