Plasmide CRISPR d'Activation (h) Lumican: sc-402001-ACT

Le gène humain **LUM** code la lumicane, un petit protéoglycane sécrété riche en leucines qui organise la fibrillogenèse du collagène et régule l’architecture de la matrice extracellulaire (MEC), son hydratation et la biomécanique des tissus. La lumicane module l’adhérence, la migration et la prolifération cellulaires via une signalisation liée aux intégrines et des interactions entre la MEC et les facteurs de croissance, influençant la réparation des plaies, le remodelage stromal et les réponses inflammatoires. Une expression altérée de **LUM** et des modifications de la composition protéoglycanique de la lumicane sont associées à la fibrose et au remodelage du microenvironnement tumoral, où l’alignement et la rigidité de la MEC peuvent façonner les voies angiogéniques et immunitaires. Ces propriétés font de la lumicane un levier moléculaire utile pour étudier la régulation du comportement cellulaire induite par la matrice dans des modèles de biologie des tissus conjonctifs et du cancer.

Lumican Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LUM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Lumican Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LUM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LUM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Lumican. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LUM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Lumican au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Lumican dans les cellules tumorales présentant une expression de LUM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.