Plasmide Double Nickase (h) LTRPC7: sc-402820-NIC

TRPM7 (LTRPC7) code un canal ionique–kinase bifonctionnel qui médie l’entrée de Mg2+ et de Ca2+ tout en reliant l’homéostasie des cations divalents à la phosphorylation sur sérine/thréonine. L’activité de TRPM7 influence la dynamique du cytosquelette, l’adhérence et la migration cellulaires, ainsi que l’excitabilité membranaire, via des voies associées à la signalisation des phosphoinositides, à la mécanotransduction et à une régulation dépendante de la kinase d’effecteurs en aval. En tant que régulateur central de l’équilibre intracellulaire du magnésium et du calcium, TRPM7 a été étudié dans le contexte de la prolifération, des réponses au stress et de l’adaptation métabolique. Une altération de la fonction ou de l’expression de TRPM7 a été associée à des mécanismes de lésions neurologiques, au remodelage cardiovasculaire et à des états de signalisation pertinents pour le cancer, ce qui soutient son intérêt en tant que cible de recherche dans de nombreux modèles de maladie.

LTRPC7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRPM7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRPM7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRPM7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRPM7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.