LTBP-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404036-ACT

LTBP3 codifica a latent transforming growth factor beta binding protein 3 (LTBP-3), uma glicoproteína da matriz extracelular que se liga ao complexo latente de TGF-β e ajuda a controlar o seu sequestro, armazenamento e ativação espacial nos tecidos. Ao regular a biodisponibilidade de TGF-β, a LTBP-3 contribui para a sinalização dependente de SMAD e para processos de remodelação da matriz extracelular que influenciam a adesão, a migração e a diferenciação celulares, bem como a homeostase tecidual. Alterações na expressão ou na função de LTBP3 têm sido associadas à desregulação da sinalização de TGF-β em contextos como fibrose, remodelação do tecido conjuntivo e biologia do microambiente tumoral, o que a torna relevante para estudos mecanísticos de sinalização dependente da matriz. Pesquisadores frequentemente investigam a LTBP-3 em vias que conectam a organização da MEC à ativação de fatores de crescimento e a programas transcricionais a jusante.

LTBP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LTBP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LTBP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LTBP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LTBP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LTBP-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LTBP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LTBP-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LTBP-3 em células tumorais com expressão de LTBP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.