Plásmido Doble Nickase (h) LRRK2: sc-402602-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LRRK2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LRRK2 (h) y el plásmido de doble nickasa LRRK2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LRRK2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LRRK2 Anticuerpo (133AT1218): sc-130159
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LRRK2 | sc-402602-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LRRK2 | sc-402602-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **LRRK2** codifica la quinasa 2 con repeticiones ricas en leucina, una quinasa serina/treonina y GTPasa multifuncional que integra señales en membranas endolisosomales y de tráfico vesicular. LRRK2 modula la fosforilación de las GTPasas Rab, la dinámica del citoesqueleto y la función de la vía autofagia–lisosoma, influyendo así en la homeostasis de los orgánulos y en la señalización inflamatoria. La actividad desregulada de LRRK2 y sus variantes están fuertemente vinculadas a la biología de la enfermedad de Parkinson y también se estudian en vías de células inmunitarias y en la neuroinflamación. Como regulador central del tráfico de membranas y de la proteostasis, LRRK2 se utiliza ampliamente para investigar respuestas al estrés y mecanismos de vulnerabilidad neuronal en modelos celulares humanos.
LRRK2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LRRK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LRRK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LRRK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LRRK2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.