LRP5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401331-ACT

LRP5 (Low-Density-Lipoprotein-Rezeptor-verwandtes Protein 5) ist ein Single-Pass-Transmembran-Korezeptor, der das kanonische Wnt/β‑Catenin-Signalweg-System reguliert, indem er mit Frizzled-Rezeptoren zusammenwirkt und die ligandabhängige Signaltransduktion steuert. Über die Modulation der β‑Catenin-Stabilisierung und der TCF/LEF-abhängigen Transkription beeinflusst LRP5 die Differenzierung von Osteoblasten, den Aufbau der Knochenmasse sowie umfassendere Programme, die Zellschicksal, Proliferation und Gewebehomöostase regulieren. Zudem ist LRP5 an Wechselwirkungen mit extrazellulären Antagonisten wie DKK und Sclerostin beteiligt, die die Empfindlichkeit des Wnt-Signalwegs an der Zelloberfläche feinjustieren. Genetische und funktionelle Störungen von LRP5 sind mit Erkrankungen der Knochendichte und der okulären Gefäßentwicklung verknüpft, was LRP5 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung Wnt-getriebener Phänotypen in menschlichen Zellen macht.

LRP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LRP5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LRP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LRP5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LRP5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LRP5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LRP5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LRP5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LRP5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LRP5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.