Plasmide CRISPR d'Activation (m) LRCH4: sc-433102-ACT

Le gène murin **Lrch4** code **LRCH4**, une protéine contenant des répétitions riches en leucine ainsi qu’un domaine d’homologie à la calponine, dont on pense qu’elle agit comme adaptateur du cytosquelette en reliant des modules d’interaction protéine–protéine à la dynamique associée à l’actine. Les protéines de la famille LRCH ont été impliquées dans la régulation de la forme cellulaire, de l’adhérence et de la motilité, des processus qui influencent le remodelage tissulaire et le comportement des cellules immunitaires. Dans les systèmes chez les mammifères, LRCH4 a été associée à des réseaux de signalisation de l’immunité innée, notamment à des voies en interface avec les réponses dépendantes des récepteurs Toll-like et des programmes transcriptionnels inflammatoires. Une régulation altérée de LRCH4 a donc été étudiée dans le contexte de phénotypes inflammatoires et de dérégulations immunitaires pertinents pour des études sur des modèles de maladie.

LRCH4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Lrch4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRCH4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Lrch4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Lrch4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRCH4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Lrch4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRCH4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRCH4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Lrch4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.