Plasmide Double Nickase (h) LOX: sc-400973-NIC

LOX code la lysyl‑oxydase, une amine oxydase sécrétée, dépendante du cuivre, qui catalyse la désamination oxydative des résidus de lysine dans le collagène et l’élastine, initiant une réticulation covalente qui stabilise l’architecture de la matrice extracellulaire. En régulant la rigidité de la matrice et la fibrillogenèse du collagène, LOX influence l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que les voies de mécanotransduction, notamment la signalisation intégrine/FAK et les programmes de remodelage de la MEC. Une activité altérée de LOX est liée à la fibrose et à un remodelage anormal des tissus conjonctifs, et sa dérégulation a été associée à des modifications de la dynamique du microenvironnement tumoral et à la formation de niches métastatiques dans de nombreux cancers. En tant qu’enzyme modifiant la matrice, LOX est fréquemment étudiée dans les contextes de la réparation des plaies, de la biologie vasculaire et de la mécanique tissulaire.

LOX Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LOX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LOX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LOX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LOX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.