Partículas Lentivirales de Activación (m) LONP1: sc-428748-LAC

Lonp1 codifica LONP1, una proteasa de serina dependiente de ATP de la matriz mitocondrial que acopla el control de calidad proteico con la proteostasis del orgánulo. LONP1 reconoce y degrada proteínas mitocondriales oxidadas o mal plegadas, favorece el recambio de componentes de la cadena respiratoria y contribuye al mantenimiento del ADNmt y de la función del ribosoma mitocondrial bajo estrés. A través de sus funciones en la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas mitocondriales, la fosforilación oxidativa y la homeostasis redox, la actividad alterada de LONP1 se asocia con fenotipos de disfunción mitocondrial que afectan el metabolismo energético y la tolerancia celular al estrés. En sistemas murinos, Lonp1 se estudia con frecuencia en contextos en los que la proteostasis mitocondrial se cruza con la neurodegeneración, la remodelación cardiometabólica y los descensos relacionados con el envejecimiento en la función mitocondrial.

Las partículas de activación lentiviral LONP1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Lonp1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LONP1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Lonp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LONP1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Lonp1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.