LMX1B Double Nickase Plasmid (h): sc-402945-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LMX1B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LMX1B Double-Nickase-Plasmid (h) und LMX1B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LMX1B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LMX1B: sc-293262
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LMX1B Double Nickase Plasmid (h) | sc-402945-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LMX1B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402945-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMX1B kodiert einen LIM-Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung die Festlegung von Zellschicksalen und die Musterbildung von Geweben reguliert, mit wichtigen Funktionen bei der Dorsalisierung der Extremitäten, der Differenzierung von Podozyten in der Niere und der Identität neuronaler Subtypen. Über Interaktionen mit LIM-Domänen-Kofaktoren und die DNA-Bindung über seine Homöodomäne koordiniert LMX1B Transkriptionsprogramme, die die Organisation der extrazellulären Matrix, die Zytoskelettdynamik und Netzwerke der Morphogensignalgebung beeinflussen. Genetische Störungen von LMX1B stehen mit dem Nagel-Patella-Syndrom in Verbindung und sind mit Podozytenfunktionsstörungen und renalen Manifestationen assoziiert, was LMX1B zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung entwicklungsbiologischer Genregulation und der Glomerulusbiologie macht. Darüber hinaus wurde eine veränderte LMX1B-Expression im Kontext von Zelllinienzuständen bei Krebs und einer Umverdrahtung transkriptioneller Netzwerke untersucht.
LMX1B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LMX1B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LMX1B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LMX1B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LMX1B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.