Particules Lentivirales d'Activation (m) LMP7: sc-421450-LAC

Le gène murin *Psmb8* code LMP7 (β5i), une sous-unité catalytique de l’immunoprotéasome inductible par l’interféron‑γ, qui remplace la sous-unité constitutive PSMB5 afin de remodeler la spécificité de clivage du protéasome. En façonnant le répertoire de peptides générés pour le chargement sur le CMH de classe I, LMP7 soutient les voies de traitement et de présentation de l’antigène et influence la surveillance immunitaire dirigée par les lymphocytes T CD8+. L’activité de LMP7 s’intègre au fonctionnement du système ubiquitine–protéasome, à l’assemblage de l’immunoprotéasome et aux programmes de signalisation inflammatoire dans les tissus immunitaires et non immunitaires. Des altérations de la régulation de PSMB8/LMP7 ont été associées à une inflammation dérégulée et à des pathologies à médiation immunitaire, ce qui en fait un point d’entrée utile pour des études mécanistiques de la protéostasie et de la présentation antigénique.

Les particules d'activation lentivirales LMP7 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Psmb8 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LMP7 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Psmb8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LMP7. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Psmb8 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.