Plasmide Double Nickase (m) LIS1: sc-422102-NIC

Le gène murin *Pafah1b1* code LIS1, une protéine régulatrice de la dynéine essentielle au transport dépendant des microtubules, à l’orientation du fuseau mitotique et au couplage du moteur dynéine–dynactine à sa cargaison lors de la migration neuronale. LIS1 agit avec NDE1/NDEL1 et la dynéine cytoplasmique pour contrôler le positionnement du centrosome, la translocation nucléaire et le développement cortical, ce qui la relie à des voies qui régissent la polarité et la division cellulaires. La perturbation des processus dépendants de LIS1 est fortement associée à des phénotypes neurodéveloppementaux, notamment à des anomalies liées à la lissencéphalie touchant la stratification neuronale et le guidage axonal. En conséquence, *Pafah1b1* est largement étudié dans des modèles de développement cérébral, de dynamiques associées aux cils et aux microtubules, et de trafic dépendant de la dynéine.

LIS1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pafah1b1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pafah1b1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pafah1b1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pafah1b1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.