Plasmide CRISPR/Cas9 KO Lipocalin-15 (h): sc-415842

Présentation

LCN15 code la lipocaline‑15, un membre de la famille des lipocalines, des protéines sécrétées qui se lient à de petits ligands hydrophobes et les transportent, notamment des lipides et des métabolites de type rétinoïde. En séquestrant et en délivrant ces ligands, la lipocaline‑15 est susceptible d’influencer la signalisation extracellulaire, l’homéostasie membranaire et la communication intercellulaire au sein des microenvironnements tissulaires. Une expression altérée des lipocalines a été associée à l’inflammation, aux réponses au stress métabolique et au remodelage épithélial, faisant de LCN15 une cible utile pour disséquer les voies de gestion des lipides et d’adaptation au stress. L’étude de la fonction de LCN15 peut éclairer les mécanismes reliant les protéines porteuses sécrétées à la régulation paracrine et aux modifications de l’état cellulaire associées aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Lipocalin-15 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LCN15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LCN15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LCN15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Lipocalin-15.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LCN15 pour l'étude de la signalisation de Lipocalin-15, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LCN15 essentiels à la fonction de Lipocalin-15
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LCN15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Lipocalin-15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Lipocalin-15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LCN15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Lipocalin-15 plasmide HDR (h) et le Lipocalin-15 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LCN15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LCN15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.