Plásmido CRISPR de Activación (h) Lingo-2: sc-414778-ACT

El gen humano **LINGO2** codifica **Lingo-2**, una proteína transmembrana de una sola pasada con repeticiones ricas en leucina y un dominio tipo Ig, implicada en la regulación de la señalización célula–célula en la membrana plasmática. Lingo-2 se ha estudiado en el contexto del desarrollo neural y los procesos sinápticos, donde las proteínas de la familia LINGO pueden influir en la guía axonal, el crecimiento de neuritas y el ensamblaje de complejos de receptores. La alteración de la expresión de **LINGO2** se ha asociado, en estudios genéticos y transcriptómicos, con rasgos y trastornos neurológicos, lo que respalda su relevancia para investigar programas de señalización que moldean la conectividad neuronal y la diferenciación celular. Como modulador asociado a la membrana, Lingo-2 proporciona un punto de entrada manejable para explorar cambios a nivel de vías mediante respuestas transcripcionales aguas abajo y lecturas de fosfoseñalización.

Lingo-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LINGO2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Lingo-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LINGO2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LINGO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Lingo-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LINGO2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Lingo-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Lingo-2 en células tumorales con expresión de LINGO2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.