Plasmide Double Nickase (h) LIMK-1: sc-401057-NIC

LIMK1 code pour la protéine LIMK‑1, une kinase sérine/thréonine qui régule la dynamique du cytosquelette d’actine en phosphorylant et en inhibant la cofiline, contrôlant ainsi le renouvellement des filaments, l’assemblage des fibres de stress et la motilité cellulaire. LIMK‑1 agit en aval de la signalisation des petites GTPases de la famille Rho via les voies ROCK et PAK, en intégrant des signaux qui modèlent l’adhésion, la migration et la croissance des neurites. Par son rôle dans le remodelage du cytosquelette, LIMK1 est étudié dans des processus tels que la plasticité synaptique et la morphogenèse, et sa dérégulation a été impliquée dans des programmes d’invasion oncogénique et des phénotypes neurodéveloppementaux. Ces connexions de voies font de LIMK1 une cible utile pour disséquer les réseaux de signalisation dépendants de l’actine et les comportements cellulaires pilotés par le cytosquelette.

LIMK-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LIMK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LIMK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LIMK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LIMK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.