Partículas Lentivirales de Activación (m) LIFR: sc-421433-LAC

Lifr codifica el receptor del factor inhibidor de la leucemia (LIFR), un receptor transmembrana de citocinas que forma complejos de señalización con gp130 para transducir ligandos de la familia LIF. En células de ratón, la activación de LIFR regula las vías JAK/STAT3, MAPK/ERK y PI3K/AKT, influyendo en el mantenimiento de células madre, el compromiso de linaje, las señales de supervivencia y la homeostasis tisular. La señalización dependiente de LIFR también se intersecta con programas del desarrollo en hueso, sistema nervioso y músculo, lo que convierte a Lifr en un nodo útil para estudiar la diferenciación y la biología regenerativa. La actividad desregulada de la vía de LIFR se ha asociado con alteraciones en la señalización inflamatoria y fenotipos oncogénicos en múltiples contextos, lo que respalda investigaciones mecanísticas en biología del cáncer y en la remodelación tisular regulada por el sistema inmunitario.

Las partículas de activación lentiviral LIFR (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Lifr en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LIFR (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Lifr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LIFR. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Lifr y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.