LHX4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403801-ACT

LHX4（LIM homeobox 4）は、homeoboxモチーフを介してDNAに結合し、細胞運命の決定や器官形成を協調的に制御するLIMドメイン転写因子であり、下垂体および中枢神経系の発生プログラムにおいて重要な役割を担います。他の転写制御因子と協調して働くことで、分化・増殖・組織パターニングに影響する、系譜（リネージ）に制限された遺伝子発現ネットワークの制御に寄与します。LHX4の機能破綻や発現制御異常は、先天性下垂体機能低下症や関連する発生異常と関連づけられており、内分泌軸の形成および神経発生における重要性を示しています。転写を司る核内制御因子として、LHX4はヒトモデル系における遺伝子制御回路や発生経路間のクロストークを研究するための、扱いやすい研究対象となります。

LHX4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LHX4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LHX4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LHX4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLHX4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LHX4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLHX4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLHX4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLHX4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLHX4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。