Plásmido CRISPR de Activación (m) LHX2: sc-421425-ACT

El gen Lhx2 de ratón codifica el factor de transcripción con homeobox LIM LHX2, un regulador nuclear que controla la especificación del destino celular, el patrón tisular y el mantenimiento de la competencia de los progenitores durante el desarrollo embrionario y posnatal. LHX2 participa en programas transcripcionales que modelan la neurogénesis y la regionalización areal de la corteza, sostienen el desarrollo de la retina e influyen en decisiones del estado epitelio–mesénquima mediante interacciones dependientes del contexto con cofactores y reguladores de la cromatina. En compartimentos de células madre y progenitoras, la actividad de LHX2 contribuye a la restricción de linaje, la temporización de la diferenciación y la supervivencia, vinculándola con vías que gobiernan redes transcripcionales del desarrollo y la accesibilidad de la cromatina. La expresión desregulada de LHX2 se ha asociado con defectos del desarrollo y estados proliferativos alterados en modelos relevantes de enfermedad, lo que la convierte en un nodo útil para diseccionar circuitos reguladores de genes en neurociencia y biología del desarrollo.

LHX2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Lhx2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LHX2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Lhx2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Lhx2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LHX2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Lhx2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LHX2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LHX2 en células tumorales con expresión de Lhx2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.