Plasmide CRISPR d'Activation (h) LGR5: sc-400726-ACT

LGR5 (récepteur couplé aux protéines G 5 contenant des répétitions riches en leucine) est un récepteur à sept domaines transmembranaires qui sert de marqueur des cellules souches et progénitrices dans de multiples épithéliums, notamment les cryptes intestinales et les follicules pileux. Il agit comme récepteur à haute affinité des R-spondines et potentialise la signalisation canonique WNT/β-caténine en stabilisant les complexes de récepteurs Frizzled/LRP, soutenant ainsi les programmes d’auto-renouvellement, de prolifération et de régénération tissulaire. En modulant les réseaux transcriptionnels gouvernés par WNT, LGR5 contribue à réguler les trajectoires de différenciation et les interactions avec la niche dans les tissus en développement et à l’âge adulte. Une expression dérégulée de LGR5 et une hyperactivation de la voie WNT sont fréquemment associées à la biologie tumorale et sont utilisées pour étudier des états de type cellules souches cancéreuses et la plasticité de lignée dans des systèmes modèles humains.

LGR5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGR5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LGR5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGR5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGR5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LGR5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGR5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LGR5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LGR5 dans les cellules tumorales présentant une expression de LGR5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.