LGA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404294-ACT

ヒトのGLS2は、ミトコンドリア型グルタミナーゼのアイソフォームであるLGAをコードしており、グルタミンをグルタミン酸とアンモニアに変換することで、TCA回路および関連する生合成経路への炭素・窒素フラックスを支える重要な酵素です。グルタミン利用の制御を通じて、GLS2はグルタチオン合成を介した細胞内レドックス恒常性に影響し、栄養ストレス下でのミトコンドリア代謝にも作用します。さらにGLS2活性は、アミノ酸センシングやストレス応答プログラムと交差し、さまざまな細胞種における増殖・分化状態を規定します。GLS2/LGAの発現異常は、がん領域や肝関連病態で観察される代謝表現型の変化と関連づけられており、代謝リプログラミング機構を研究するうえで有用な結節点となります。

LGA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GLS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LGA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GLS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGLS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LGAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGLS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLGA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGLS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLGA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。