LEPROTL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405575-ACT

LEPROTL1（leptin receptor overlapping transcript-like 1）は、受容体の輸送やエンドソームでのソーティングの制御に関与するとされる小型の膜貫通タンパク質をコードしており、細胞表面受容体の量やシグナル伝達能に影響を与えます。内在化とリサイクリングを調節することで、LEPROTL1は増殖因子応答性やサイトカインシグナル伝達に関連する下流経路の働きを形作り、細胞代謝や増殖制御にも広範な影響を及ぼし得ます。LEPROTL1の発現変化は、ヒト疾患を対象とした分子プロファイリング研究で報告されており、受容体恒常性の破綻を検討するための機構的な結節点としての有用性が示唆されています。このことからLEPROTL1は、膜タンパク質のターンオーバー、シグナル減衰、ならびにストレスや疾患関連状態における経路の再配線を研究する上で重要な対象となります。

LEPROTL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LEPROTL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LEPROTL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LEPROTL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLEPROTL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LEPROTL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLEPROTL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLEPROTL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLEPROTL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLEPROTL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。