Plasmide CRISPR/Cas9 KO LDH-A (r): sc-437361
- Espèces cibles: rat
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- LDH-A Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique LDH-A, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LDH-A Antibody (F-3): sc-137244
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO LDH-A (r) | sc-437361 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La lactate déshydrogénase A (LDH-A) catalyse l’interconversion du pyruvate et du lactate, avec un cycle concomitant NADH/NAD⁺, une réaction clé qui soutient la glycolyse anaérobie et l’homéostasie rédox. Dans les cellules de rat, la LDH-A contribue à maintenir le flux glycolytique en conditions d’hypoxie et de forte demande énergétique, en influençant la production de lactate, l’équilibre du pH cytosolique et les interactions métaboliques avec le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). L’activité de la LDH-A est étroitement liée aux programmes de reprogrammation métabolique qui accompagnent la prolifération et l’adaptation au stress, notamment les réponses régulées par HIF-1 et les modifications de la disponibilité en NAD⁺. Une dérégulation du métabolisme du lactate dépendant de la LDH-A a été associée à des contextes pathologiques tels que les lésions ischémiques, l’inflammation et des phénotypes métaboliques de type tumoral, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation métabolique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LDH-A (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LDH-A.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de LDH-A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de LDH-A
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le LDH-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le LDH-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le LDH-A plasmide HDR (r) et le LDH-A (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.