Plasmide Double Nickase (h) LASS6: sc-403901-NIC

CERS6 code la céramide synthase 6 (LASS6), une enzyme localisée dans le réticulum endoplasmique qui génère préférentiellement la C16‑céramide, un sphingolipide bioactif central régulant la composition membranaire et la signalisation. En contrôlant l’abondance de céramide, LASS6 influence le métabolisme des sphingolipides et s’articule avec des voies qui régissent l’apoptose, l’autophagie, les réponses au stress du RE et la signalisation inflammatoire. Une activité modifiée de CERS6 a été associée à une dérégulation de l’homéostasie lipidique et à des phénotypes pertinents pour la survie et la migration des cellules cancéreuses, le stress métabolique et des processus neuro‑inflammatoires. En tant que nœud de l’interconversion céramide–sphingomyéline–glycosphingolipides, CERS6 est fréquemment étudié pour relier le remodelage lipidique à la fonction des organites et aux programmes d’adaptation au stress.

LASS6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CERS6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CERS6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CERS6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CERS6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.