Particules Lentivirales d'Activation (h) LASP-1: sc-404630-LAC

LASP1 code pour la protéine 1 à domaines LIM et SH3 (LASP‑1), un adaptateur d’adhérence focale se liant à l’actine, qui se localise aux lamellipodes, aux fibres de stress et aux jonctions cellule‑cellule afin de coordonner le remodelage du cytosquelette. LASP‑1 couple la signalisation au niveau des complexes d’adhérence à la dynamique de l’actine, influençant des processus tels que la migration cellulaire, la formation de protrusions membranaires et la mécanotransduction. Grâce à des interactions avec des protéines telles que la zyxin, VASP et des composants de la signalisation des adhérences focales, LASP‑1 est associée à des voies qui régulent le renouvellement des adhérences et la motilité. Une expression dérégulée de LASP1 a été rapportée dans de nombreux contextes tumoraux et fait fréquemment l’objet d’études pour ses rôles dans l’invasion, les phénotypes associés aux métastases et des programmes transcriptionnels dépendants du cytosquelette.

Les particules d'activation lentivirales LASP-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LASP1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LASP-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LASP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LASP-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LASP1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.