Plasmide Double Nickase (m) LAMP-2: sc-421383-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) LAMP-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LAMP-2 Double Nickase (m) et le plasmide LAMP-2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Lamp2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LAMP-2 Antibody (ABL-93): sc-20004
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) LAMP-2 | sc-421383-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) LAMP-2 | sc-421383-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Lamp2** code la protéine 2 associée à la membrane lysosomale (LAMP-2), une glycoprotéine abondante de la membrane limitante des lysosomes qui contribue à l’intégrité des lysosomes, au trafic vésiculaire et à la capacité de dégradation. LAMP-2 participe à des voies liées à l’autophagie, notamment l’autophagie médiée par des chaperonnes et la fusion autophagosome–lysosome, influençant ainsi le renouvellement des protéines à longue durée de vie et des organites. La perturbation de la fonction de LAMP-2 est associée à une altération de l’homéostasie lysosomale, à des réponses modifiées au stress métabolique et à l’accumulation de substrats autophagiques, des processus pertinents dans des modèles de cardiomyopathie et de neurodégénérescence. Lamp2 est donc largement étudié dans des contextes impliquant le trafic endolysosomal, la protéostasie et la signalisation inflammatoire induite par des défauts de clairance cellulaire.
LAMP-2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Lamp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Lamp2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Lamp2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Lamp2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.