Plasmide Double Nickase (h) LAMP-2: sc-400215-NIC

LAMP2 code pour la glycoprotéine 2 associée à la membrane lysosomale (LAMP-2), un composant majeur de la membrane limitante du lysosome qui contribue à l'intégrité du lysosome et à sa fonction protéolytique. LAMP-2 participe au trafic endosomal–lysosomal et à des processus liés à l'autophagie, notamment l'autophagie médiée par les chaperons et la fusion autophagosome–lysosome, influençant ainsi le renouvellement des protéines cytosoliques et des organites. Par ces voies, LAMP-2 aide à coordonner les réponses cellulaires au stress nutritionnel, le contrôle qualité et la dégradation, liée à l'immunité, du matériel internalisé. Des altérations de la fonction de LAMP2 et un dysfonctionnement lysosomal sont associés à des troubles caractérisés par des défauts marqués d'autophagie et d'homéostasie protéique, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques en biologie des lysosomes.

LAMP-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.