Plasmide Double Nickase (h) Laminin-R: sc-417155-NIC

RPSA code le récepteur 1 de la laminine (Laminin-R), une protéine multifonctionnelle associée à la surface cellulaire et aux ribosomes, qui se lie à la laminine dans la matrice extracellulaire et contribue à l’adhésion cellulaire, à la migration et à l’organisation du cytosquelette. Via une signalisation dépendante de la laminine, Laminin-R s’interface avec des voies contrôlant l’organisation membranaire, la dynamique des adhérences focales et la régulation, induite par la matrice extracellulaire, de la prolifération et de la survie. RPSA participe également à la biogenèse des ribosomes et à la traduction, reliant les signaux extracellulaires à la protéostasie et au contrôle de la croissance. Une expression dérégulée de Laminin-R et des interactions laminine altérées ont été associées à l’invasion tumorale et à des phénotypes métastatiques, faisant de RPSA une cible fréquente dans les études sur la communication cellule–matrice et la biologie du cancer.

Laminin-R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RPSA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RPSA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RPSA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RPSA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.