Plásmido Doble Nickase (h) Laminin γ-2: sc-401068-NIC

LAMC2 codifica la laminina γ2, una subunidad clave de la laminina-332 en las membranas basales que sostiene la adhesión, la polaridad y la migración epitelial mediante interacciones con integrinas y otros receptores de la matriz extracelular. La laminina γ2 contribuye a la organización de los hemidesmosomas y a la remodelación de la matriz, coordinando la señalización a través de las vías de adhesión focal, PI3K–AKT y MAPK, que influyen en la dinámica del citoesqueleto y la supervivencia celular. La expresión alterada de LAMC2 o la arquitectura de la laminina-332 se asocian con una integridad epidérmica deteriorada y con interacciones epitelio–estroma anómalas, y se han estudiado en contextos de lesión tisular y displasia epitelial. Como determinante asociado a la MEC de la función de barrera y la motilidad, LAMC2 se investiga con frecuencia en modelos de invasión, reepitelización de heridas y señalización de la matriz extracelular.

Laminin γ-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LAMC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LAMC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LAMC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LAMC2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.