Laminin β-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401105-ACT

LAMB1 kodiert Laminin β1, eine zentrale Untereinheit mehrerer Laminin-Heterotrimere, die einen wichtigen strukturellen und signalvermittelnden Bestandteil der Basalmembranen bilden. Laminin β1 unterstützt den Aufbau der extrazellulären Matrix, Zelladhäsion, Polarität und Migration durch Interaktionen mit Integrinen und anderen Matrixrezeptoren und beeinflusst dabei Signalwege wie die Fokaladhäsions-Signalgebung und die Umgestaltung des Zytoskeletts. Durch die Sicherung der Basalmembranintegrität und der Zell–Matrix-Kommunikation trägt Laminin β1 zur Gewebearchitektur in Epithelien sowie in Kompartimenten des Gefäß- und Nervensystems bei. Eine fehlregulierte LAMB1-Expression oder eine gestörte Organisation der Basalmembran wird häufig im Zusammenhang mit Entwicklungsdefekten, Tumorinvasion und Metastasierung sowie fibrotischen oder entzündlichen Mikroumgebungen untersucht.

Laminin β-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LAMB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Laminin β-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LAMB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LAMB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Laminin β-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LAMB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Laminin β-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Laminin β-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LAMB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.