Plasmide Double Nickase (h) Laminin α-5: sc-401168-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Laminin α-5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Laminin α-5 Double Nickase (h) et le plasmide Laminin α-5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LAMA5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Laminin α-5 Antibody (4B12): sc-130542
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Laminin α-5 | sc-401168-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Laminin α-5 | sc-401168-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMA5 code la laminine α-5, une sous-unité centrale de plusieurs hétérotrimères de laminine de la membrane basale, qui organisent l’architecture de la matrice extracellulaire et régulent la signalisation cellule–matrice. La laminine α-5 soutient l’adhérence, la polarité, la migration et la survie des cellules épithéliales et endothéliales via des voies dépendantes des intégrines et du dystroglycane, qui convergent vers la signalisation des adhésions focales et le remodelage du cytosquelette. Elle est essentielle à la morphogenèse tissulaire et à l’intégrité des barrières, en influençant des processus tels que l’angiogenèse et la fonction de la membrane basale glomérulaire. Une expression altérée de LAMA5 ou une assemblage défectueux de la membrane basale est associé à des anomalies du développement des organes et a été étudié dans des contextes d’invasion tumorale, de fibrose, ainsi que de physiopathologie vasculaire et rénale.
Laminin α-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMA5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.