Plasmide CRISPR d'Activation (h) Laminin α-5: sc-401168-ACT

LAMA5 code la laminine α-5, une sous-unité centrale des hétérotrimères laminine-511 et laminine-521 qui organisent les membranes basales et régulent l’adhésion, la polarité et la différenciation des cellules épithéliales et endothéliales. Par ses interactions avec les intégrines, le dystroglycane et d’autres récepteurs de la matrice extracellulaire, la laminine α-5 contribue à la signalisation des adhésions focales et à des voies en aval telles que FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, qui coordonnent la migration et la survie. Les matrices riches en LAMA5 façonnent l’architecture tissulaire dans la peau, le glomérule rénal, le poumon et le système vasculaire, en influençant la fonction de barrière et la morphogenèse. Un dépôt ou une signalisation dérégulés de la laminine α-5 sont associés à une altération de l’intégrité des membranes basales et ont été étudiés dans des contextes incluant la fibrose, le remodelage inflammatoire et les microenvironnements d’invasion tumorale.

Laminin α-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LAMA5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Laminin α-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LAMA5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LAMA5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Laminin α-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LAMA5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Laminin α-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Laminin α-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de LAMA5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.