Plasmide Double Nickase (h) Laminin α-2: sc-401162-NIC

LAMA2 code la laminine α‑2, une sous-unité clé des hétérotrimères laminine‑211/221 qui organisent les membranes basales et relient l’architecture de la matrice extracellulaire aux récepteurs de surface cellulaire, notamment les intégrines et le dystroglycane. Grâce à ces interactions, la laminine α‑2 soutient l’adhésion, la migration et les voies de signalisation de survie, et contribue à l’intégrité des tissus dans le muscle squelettique, le nerf périphérique et d’autres environnements riches en lame basale. L’assemblage matriciel dépendant de LAMA2 influence l’organisation du cytosquelette et les voies de mécanotransduction qui régulent la stabilité des myofibres et la fonction des cellules de Schwann. L’altération de LAMA2 est fortement associée à la dystrophie musculaire congénitale avec déficit en mérosine et à des phénotypes neuromusculaires apparentés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes pathologiques induits par la MEC.

Laminin α-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.