L-Selectin/CD62L/SELL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422872

Panoramica

Sell codifica la L-selectina (CD62L), un recettore di adesione leucocitaria che media l’homing dei linfociti e il rolling dei leucociti sulle venule endoteliali ad alto endotelio attraverso il legame con le addressine dei linfonodi periferici e con altri ligandi glicani solfatati e sialilati. Nelle cellule immunitarie murine, lo shedding e il traffico di CD62L coordinano le transizioni tra fenotipi naïve, memoria centrale e attivati, collegando la dinamica di adesione alla migrazione guidata dalle chemochine e alla sorveglianza immunitaria. La segnalazione di SELL e il clivaggio dell’ectodominio si intersecano con le cascate infiammatorie e con l’attivazione endoteliale, modulando il reclutamento dei leucociti durante danno tissutale e infezione. Un traffico alterato dipendente dalla L-selectina è comunemente studiato in modelli di autoimmunità, infiammazione cronica e immunologia dei tumori, in cui la localizzazione e il priming delle cellule influenzano i fenotipi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO L-Selectin/CD62L/SELL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sell in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sell insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sell a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina L-Selectin/CD62L/SELL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sell per lo studio della segnalazione di L-Selectin/CD62L/SELL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sell critici per la funzione di L-Selectin/CD62L/SELL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sell per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sell. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal L-Selectin/CD62L/SELL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR L-Selectin/CD62L/SELL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sell per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sell definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.