Plasmide CRISPR d'Activation (h) L-Plastin: sc-402131-ACT

LCP1 code pour la L‑plastine, une protéine de faisceautage de l’actine exprimée principalement dans les cellules hématopoïétiques, qui stabilise l’actine filamentaire et favorise le remodelage dynamique du cytosquelette. En régulant la formation des lamellipodes, l’adhérence dépendante des intégrines et l’architecture de la synapse immunologique, la L‑plastine influence l’activation des leucocytes, la chimiotaxie et les fonctions phagocytaires. Son activité recoupe des voies de signalisation qui coordonnent la motilité et l’adhérence, notamment des effecteurs en aval de PI3K et de petites GTPases qui relient les signaux des récepteurs à l’organisation de l’actine. Une expression ou une phosphorylation dérégulée de LCP1 a été associée à des modifications du comportement des cellules immunitaires et a été rapportée dans des contextes d’inflammation et d’invasivité des cellules cancéreuses, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la migration et de l’infiltration tissulaire.

L-Plastin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LCP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

L-Plastin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LCP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LCP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de L-Plastin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LCP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de L-Plastin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie L-Plastin dans les cellules tumorales présentant une expression de LCP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.