Particules Lentivirales d'Activation (h) KMO: sc-418366-LAC

La KMO (kynurénine 3-monooxygénase) humaine est une enzyme mitochondriale flavino-dépendante qui catalyse l’hydroxylation de la L‑kynurénine en 3‑hydroxykynurénine, un point de branchement clé de la voie tryptophane–kynurénine. En contrôlant le flux vers des métabolites en aval tels que l’acide quinolinique et des intermédiaires de la biosynthèse du NAD⁺, la KMO contribue à façonner l’équilibre rédox cellulaire, la fonction mitochondriale et la signalisation inflammatoire. Une activité de la KMO altérée a été associée à des profils dérégulés de métabolites de la kynurénine observés dans la neuroinflammation, la neurodégénérescence, les troubles immuno‑médiés et le remodelage métabolique associé au cancer. La modulation de l’expression de la KMO est donc utile pour analyser les interactions entre métabolisme et immunité ainsi que les effets dépendants de la voie sur le destin cellulaire et les réponses au stress.

Les particules d'activation lentivirales KMO (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KMO dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales KMO (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KMO, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de KMO. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KMO ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.