Plasmide CRISPR d'Activation (m) KLRG1: sc-424537-ACT

Le gène murin **Klrg1** code **KLRG1**, un récepteur inhibiteur de type lectine C, fortement exprimé par les sous-populations effectrices différenciées et mémoires des cellules NK et des lymphocytes T CD8+. En se liant à des cadhérines classiques telles que l’E-cadhérine à la surface des cellules cibles, KLRG1 transmet des signaux inhibiteurs qui modulent la cytotoxicité, la production de cytokines et la capacité proliférative, reliant ainsi les signaux d’adhérence à une régulation de type « point de contrôle » immunitaire. KLRG1 est largement utilisé comme marqueur de la maturation et de l’état fonctionnel des cellules immunitaires, et des altérations de la signalisation KLRG1 ont été associées à des changements des réponses immunitaires antivirales et antitumorales, au vieillissement immunitaire et à l’inflammation chronique. Ces caractéristiques font de **Klrg1** un nœud pertinent pour étudier la régulation immunitaire, la surveillance tissulaire et la persistance des cellules effectrices dans des modèles de maladie.

KLRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Klrg1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KLRG1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Klrg1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Klrg1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KLRG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Klrg1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KLRG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KLRG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Klrg1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.