Plasmide CRISPR d'Activation (h) KLK4: sc-404256-ACT

KLK4 code la peptidase 4 apparentée aux kallikréines, une protéase à sérine sécrétée qui contribue à la protéolyse extracellulaire et au remodelage du microenvironnement péricellulaire. En clivant des substrats de la matrice extracellulaire et des substrats associés à la signalisation, KLK4 peut influencer des cascades de protéases, des programmes de différenciation épithéliale et la communication paracrine au sein des tissus glandulaires. Une expression dérégulée de KLK4 et une activité protéasique anormale ont été associées à une altération de l’homéostasie tissulaire et à un remodelage lié aux tumeurs, ce qui étaye son utilisation comme nœud fonctionnel dans les études des phénotypes liés à l’invasion et de la signalisation régulée par les protéases. KLK4 est également étudiée aux côtés d’autres kallikréines afin de cartographier leur régulation coordonnée au sein des réseaux protéolytiques et leurs effets en aval sur le comportement cellulaire.

KLK4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KLK4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KLK4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KLK4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KLK4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KLK4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KLK4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KLK4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KLK4 dans les cellules tumorales présentant une expression de KLK4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.