Plasmide Double Nickase (h) KLHL9: sc-406655-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) KLHL9 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide KLHL9 Double Nickase (h) et le plasmide KLHL9 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KLHL9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) KLHL9 | sc-406655-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) KLHL9 | sc-406655-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLHL9 code une protéine de la famille BTB–BACK–Kelch qui agit comme adaptateur de substrat au sein des complexes d’ubiquitine‑ligase E3 de type RING associés à Cullin‑3 (CUL3), contribuant ainsi à la spécificité du renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. Par une ubiquitination régulée, KLHL9 participe à la protéostasie cellulaire et influence des processus liés à l’organisation du cytosquelette et à la progression du cycle cellulaire, notamment le contrôle de la mitose. Des perturbations de KLHL9 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuromusculaires, ce qui concorde avec l’importance d’un signalement ubiquitine équilibré dans des tissus excitables et à longue durée de vie. En tant que protéine KLHL humaine, elle est souvent étudiée dans des voies reliant la reconnaissance des substrats par les ligases E3 aux réponses au stress et à l’homéostasie cellulaire.
KLHL9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KLHL9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KLHL9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KLHL9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KLHL9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.