Plasmide CRISPR/Cas9 KO KLHL9 (m): sc-433908

Présentation

Klhl9 code la protéine murine KLHL9, un adaptateur de substrats de la famille BTB–BACK–Kelch qui coopère avec les complexes ligases E3 d’ubiquitine CUL3-RBX1 afin de favoriser l’ubiquitinylation et la dégradation, dépendante du protéasome, de protéines clientes spécifiques. Grâce à ce contrôle de la protéostasie médié par l’ubiquitine, KLHL9 contribue à la régulation du contrôle qualité des protéines, de processus liés au cycle cellulaire et de sorties de signalisation qui dépendent de l’élimination rapide des substrats. Les perturbations des adaptateurs CUL3–KLHL sont largement pertinentes dans le contexte du dérèglement des voies de l’ubiquitine, impliqué dans le neurodéveloppement, la biologie neuromusculaire et le remodelage du protéome associé au cancer, faisant de Klhl9 un nœud utile pour étudier la spécificité du système ubiquitine–protéasome. Dans des modèles murins, des approches de perte de fonction permettent de disséquer comment la sélection de substrats dépendante de KLHL9 façonne des phénotypes cellulaires en aval dans des tissus ou types cellulaires définis.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KLHL9 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Klhl9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Klhl9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Klhl9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KLHL9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Klhl9 pour l'étude de la signalisation de KLHL9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Klhl9 essentiels à la fonction de KLHL9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Klhl9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KLHL9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KLHL9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Klhl9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KLHL9 plasmide HDR (m) et le KLHL9 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Klhl9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Klhl9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.