Plasmide Double Nickase (h) KLC1: sc-401881-NIC

KLC1 code la chaîne légère 1 de la kinésine, une sous-unité accessoire de la kinésine‑1 qui relie les adaptateurs de cargaison au moteur KIF5 afin d’assurer un transport dépendant de l’ATP le long des microtubules. Par ses interactions avec les vésicules, les mitochondries, les endosomes et des complexes ARN/protéines, KLC1 contribue à un trafic polarisé indispensable à la croissance des neurites, au maintien synaptique et à la répartition des organites. Le transport axonal régulé par KLC1 s’articule avec la dynamique du cytosquelette et des voies de signalisation intracellulaire qui coordonnent l’homéostasie neuronale et les réponses au stress. Des altérations de la prise en charge des cargaisons par la kinésine‑1 et des défauts de transport sont fréquemment étudiés dans le contexte des processus neurodégénératifs et d’autres troubles associés à une perturbation du trafic intracellulaire.

KLC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KLC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KLC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KLC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KLC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.