Plasmide Double Nickase (h) KIR6.2: sc-401139-NIC

KCNJ11 code la sous-unité KIR6.2 d’un canal potassique à rectification entrante, un composant central des canaux potassiques sensibles à l’ATP (KATP) qui relient l’état métabolique cellulaire à l’excitabilité membranaire. Dans les cellules bêta pancréatiques, KIR6.2 contribue à fixer le potentiel de repos et régule la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose en intégrant une régulation (gating) dépendante du rapport ATP/ADP aux variations de l’entrée de Ca2+ cytosolique. Dans des tissus excitables tels que le cœur et le muscle squelettique, les canaux KATP modulent la durée du potentiel d’action et protègent contre le stress métabolique grâce à une adaptation électrophysiologique. Des variations génétiques ou une régulation altérée de KCNJ11 ont été associées à des troubles de la sécrétion d’insuline et de l’homéostasie du glucose, ce qui en fait une cible largement utilisée en recherche sur la signalisation métabolique et la physiologie des canaux ioniques.

KIR6.2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNJ11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNJ11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNJ11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNJ11.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.