Particules Lentivirales d'Activation (h) KIF20A: sc-403194-LAC

KIF20A (membre 20A de la famille des kinésines ; MKLP2) est une protéine motrice dépendante des microtubules, indispensable à la progression mitotique, jouant des rôles clés dans l’organisation du fuseau, la ségrégation des chromosomes et la cytokinèse. Elle coordonne la dynamique du fuseau central/du corps intermédiaire (midbody) et est fonctionnellement liée aux réseaux de régulation du cycle cellulaire, notamment à la signalisation dépendante d’Aurora B et à la formation de l’anneau contractile pilotée par RhoA. Une expression dérégulée de KIF20A a été associée à des phénotypes prolifératifs et à une altération de la fidélité mitotique dans plusieurs contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le stress de division cellulaire et l’instabilité génomique. La modulation expérimentale de KIF20A permet d’explorer la sortie de mitose, le calendrier de l’abscission et la communication croisée microtubules–actine dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales KIF20A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KIF20A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales KIF20A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KIF20A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de KIF20A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KIF20A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.